早孕笔最早可在受孕后7-10天检测出是否怀孕。具体时间与女性个体激素水平、受精卵着床时间以及早孕笔灵敏度相关，多数建议在月经延迟1周后使用以提高准确性。
受精卵成功着床后，胎盘滋养层细胞开始分泌人绒毛膜促性腺激素hCG，这种激素会随尿液排出。早孕笔通过检测尿液中hCG浓度判断是否怀孕。不同品牌早孕笔对hCG的敏感度存在差异，部分高灵敏度产品可检测到20-25mIU/mL的hCG浓度，理论上能在受孕后7天左右显示结果。但此时激素水平较低，可能出现假阴性。月经周期规律的女性，排卵后约14天是检测窗口期，而月经不规律者需根据同房时间推算。晨尿中hCG浓度较高，建议首次检测选择早晨以提高准确率。
使用早孕笔需注意检查产品有效期，避免受潮或误操作。读取结果需严格遵循说明书时间，过早或过晚判读可能导致误差。若检测呈阴性但月经持续延迟，建议3天后复测。宫外孕、近期流产或服用含hCG药物可能干扰检测结果。早孕笔仅作为初步筛查，最终确诊需结合血hCG检测或超声检查。情绪紧张、过度劳累等因素也可能引起月经推迟，需综合评估身体状态。